Liga ini terdiri daripada 32 pasukan yang kelompokkan kepada dua "sidang" (conference) masing-masing terdiri daripada 16 pasukan. Setiap conference ini dibahagikan menjadi 4 divisi masing-masing terdiri dari 4 pasukan. Setiap pasukan berkeanggotaan maksimum sebanyak 53 pemain.

Setiap persatuan NFL diberikan keizinan waralaba liga untuk beroperasi di kota mereka. Waralaba ini mencakupi:

• kawasan pasukan (Bahasa Inggeris: home territory) yang merangkumi 75 batu mengelilingi batas kota atau setengah jarak antara dua kota jika pasukan berada dalam 100 batu dari pasukan kota lain, )
• wilayah pemasaran pasukan.

Setiap anggota NFL memiliki hak eksklusif mengoperasikan dan merumah pertandingan profesional di dalam wilayah teritori mereka dan hak eksklusif mengiklankan, mempromosikan, dan menjadi tuan rumah acara di kawasan pemasaran mereka. Ada beberapa pengecualian untuk aturan ini, terutama yang berkaitan dengan pasukan yang dekat satu sama lain: San Francisco 49ers dan Oakland Raiders hanya memiliki hak eksklusif di kota mereka dan hak saham di luar itu.

Ada pasukan yang beroperasi di kota yang sama (misalnya New York Giants dan New York Jets) atau negara bagian yang sama (misalnya California, Florida, dan Texas) membagi hak ke wilayah kota sendiri dan wilayah pemasaran negara bagian masing-masing.

Berbeda dengan Major League Baseball, Major League Soccer, National Basketball Association dan National Hockey League, pasukan-pasukan dari Kanada tidak memasuki lga ini kerana negara tersebut mempunyai liga setarafnya yang tersendiri iaitu Canadian Football League.